ផលិតផល

ការវិភាគនៃព្រឹត្តិការណ៍ phosphorylation proteome-wide នៅតែជាបញ្ហាប្រឈមក្នុងការវិភាគដ៏សំខាន់ ដោយសារតែភាពស្មុគស្មាញដ៏ធំនៃបណ្តាញ phosphorylation ប្រូតេអ៊ីន។នៅក្នុងការងារនេះ យើងវាយតម្លៃការបំពេញបន្ថែមនៃ Lys-N, Lys-C និង trypsin ទាក់ទងនឹងសមត្ថភាពរបស់ពួកគេក្នុងការរួមចំណែកដល់ការវិភាគសកលនៃ phosphoproteome ។កំណែចម្រាញ់នៃការផ្លាស់ប្តូរ cation ដ៏រឹងមាំ pH ទាប ត្រូវបានប្រើដើម្បីបំបែក N-terminally acetylated, phosphorylated និង peptides nonmodified ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព។phosphopeptides សរុបចំនួន 5036 មិនអាចកំណត់អត្តសញ្ញាណបានជាមួយនឹងអត្រានៃការរកឃើញមិនពិត <1% ពីប្រូតេអ៊ីន 1 mg ដោយប្រើការបញ្ចូលគ្នានៃអង់ស៊ីមទាំងបី។ទិន្នន័យរបស់យើងបានបង្ហាញថាការត្រួតស៊ីគ្នារវាងសំណុំទិន្នន័យ phosphopeptide ដែលបង្កើតជាមួយ proteases ផ្សេងគ្នាគឺតិចតួច ចំណែកឯការត្រួតគ្នារវាងសំណុំទិន្នន័យ tryptic ដែលបង្កើតស្រដៀងគ្នាពីរត្រូវបានរកឃើញថាខ្ពស់ជាងយ៉ាងហោចណាស់ 4 ដង។នៅក្នុងវិធីនេះ ការប្រើប្រាស់ស្របគ្នានៃ Lys-N និង trypsin បានអនុញ្ញាតឱ្យមានការកើនឡើង 72% នៃចំនួន phosphopeptides ដែលបានរកឃើញ ធៀបនឹង d ទៅ trypsin តែឯង ចំណែកឯការពិសោធន៍ចម្លង trypsin នាំឱ្យកើនឡើង 25% ប៉ុណ្ណោះ។ដូច្នេះនៅពេលផ្តោតតែលើទិន្នន័យ trypsin និង Lys-N យើងបានកំណត់អត្តសញ្ញាណ phosphopeptides 4671 ដែលមិនមានកំណត់ឡើងវិញ។ការវិភាគបន្ថែមលើគេហទំព័រដែលបានរកឃើញបានបង្ហាញថា សំណុំទិន្នន័យ Lys-N និង trypsin ត្រូវបានពង្រឹងនៅក្នុងគំនូរ phosphorylation ខុសគ្នាខ្លាំង ដែលបង្ហាញឱ្យឃើញបន្ថែមទៀតថា វិធីសាស្រ្ត multiprotease មានតម្លៃណាស់ក្នុងការវិភាគ phosphoproteome ។